Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展极快的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来去甲自身人体内到显现出来1同型冠心病临床疼痛的令人满意叛将在儿童时期就有很好的说明了，多个去甲自身人体内乙型肝炎的儿童里面有70%在人体内转换后10短期内患有冠心病，而随访15年的儿童这一数量提高到84%。相比较之下，占临床1同型冠心病一半以上的同型1同型冠心病的出院有助于还并未得到充分的研究。

越来越多的人开始适用分期该系统来定义1同型冠心病的令人满意：形态在显现出来多种去甲自身人体内时转至第1阶段，显现出来血糖异常时转至第2阶段，显现出来疼痛时转至第3阶段。一些多发去甲自身人体内乙型肝炎的形态，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为出院的1同型冠心病。我们以前说明了了一四组在首次检测到多种去甲自身人体内比对后将近10年无冠心病的太快令人满意者，这四组病症000人少，但相似性非常具体。随后，我们发现去甲自身抗原甲基化CD8+T肝细胞质子化在令人满意比较慢的病症里面必需不存在，但在近期出院和长期存在的冠心病病症里面很容易检测到。这可能指出，与令人满意病症相比较，这些病症化脓性质子化的闭环增强。

早期研究指出，尽管闭环性T肝细胞(Treg)数目较长星期，但冠心病病症存在一些功能缺陷，其里面最主要对IL-2的质子化能力降低。此外，冠心病病症里面的振荡CD4+T肝细胞可能对闭环非常具抵抗性，体现为振荡T肝细胞的抑止减弱，自然转化成的Treg和体外转化成的作用于Treg，以及抗原年中的CD4+T肝细胞里面IL-2质子化减弱。本研究的旨在是说明了了CD4+闭环性T肝细胞(Treg)在一小群极比较慢令人满意者里面的相似性，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为了将的纵向研究，在21岁以下出院的病症亲属里面检查和1同型冠心病的危险诱因。我们以前说明了了长期比较慢令人满意者的相似性，他们保持多重去甲自身人体内乙型肝炎至少10年，但并未显现出来冠心病的临床疼痛，慢性或非同步进行性化脓性。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量血液比对的比较慢令人满意者纳入T和B肝细胞功能数据分析。在目前的研究里面，8名慢令人满意者(SP四组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身人体内乙型肝炎。所有的与会者都保持稳定1同型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身人体内对某些抗原的乙型肝炎质子化，然而，一名病症已经保持稳定2期将近6年，但并未显现出来临床疼痛，一名病症被诊断为冠心病，该受试者72岁，在野外科学实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计学里面对该遗传物质同步进行了单独可能性评估。分立外周血单个氘肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞术和T肝细胞抑止试制可能性评估遗传物质里面Treg的Hz、表同型和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、相关联和回归)同步进行无监理聚类数据分析，可能性评估Treg表同型。

结果：与健康遗传物质相比较，来自慢令人满意体的清醒CD4+T肝细胞的监理聚类标示出，触发的清醒CD4+ TregHz提高，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)坚称提高有关。一名HbA1c升高的病症与令人满意比较慢者和匹配的相符合四组相比较，Treg磬有所各不相同。功能数据分析指出，与健康遗传物质相比较，来自比较慢令人满意体的Treg特异性的CD4+振荡T肝细胞抑止明显受损。体现为对振荡CD4+T肝细胞CD25和CD134坚称的抑止提高。

所示1 侧重的表同型数据分析标示出，CD4+Treg亚同型在慢令人满意函数调用里面提高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标识物坚称确认出10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个链表代表一个一个大(100个一个大)，非常大的元一个大(10个元一个大)在链表四组周围手工。每个链表里面的碗所示坚称单个标识的坚称级别。(b)每个元聚类的热所示，以标示出主体标识坚称。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起总质量为每个metacluster装入支线所示(总质量> 0.05%)考虑到为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。深白色圆圈代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 适用CITRUS的预测模同型表明，TregHz的提高是令人满意比较慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR坚称同步进行分立，演示FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(星点)四组以及遗传物质SP 606(深白色)里面CD25+ cd127的Hz汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装入支线所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3坚称强度填充，左下角突出的簇被识别为SP和HD函数调用之间的各不相同。(j)装入支线所示标示出了在SP(星点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比起总质量(数量)。(k)直方所示标示出每个簇的表同型(粉红色)和Treg标识比起坚称与时代背景坚称(白色);上列，闪存Treg_3;下面悄悄，闪存Treg_4。时代背景与所有其他簇里面标识的坚称有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

所示3 与健康献血者相比较，令人满意比较慢者清醒treg的GITR提高。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个坚称标识的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的坚称热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(黑色)、所有SP(白色)和SP 606(深白色)的FlowSOM GITR坚称串联，标示出直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(深白色)所有遗传物质最主要，p< 0.05(白色)遗传物质SP 606和匹配的HD不最主要在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR坚称，从分级门控，从所有HD(黑色)、所有SP(白色)和SP 606(深白色)串联，标示出直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

所示4 来自比较慢令人满意的CD4+ treg肝细胞控制振荡CD4+T肝细胞的能力降低。SP四组用白色的支线和圆圈坚称，HD四组用银色的支线和圆圈坚称，深白色的支线/圆圈坚称遗传物质sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标识为CFSE, Treg按辨别的数量校准。用抗CD3 /28微珠再生肝细胞，指导3天后同步进行流式肝细胞术检测。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg指导(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。适用乙型肝炎相符合(触发的鼓动肝细胞则有treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 振荡CD4+T肝细胞对比较慢令人满意的T肝细胞再生的抑止非常脆弱。SP四组用白色的支线和圆圈坚称，HD四组用银色的支线和圆圈坚称，深白色的支线/圆圈坚称遗传物质sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标识，treg按辨别的数量校准。用抗CD3 /28微珠再生肝细胞，指导3天后同步进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝诱导数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同指导。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑止百分叛将(b)。(c,d) CD25抑止百分叛将(c)和CD134抑止百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里面的坚称。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出的假设是，来自比较慢令人满意子的再生清醒CD4+Treg在GITR坚称里面得到了扩展和丰富，强调了进一步研究Treg在1同型冠心病可能性形态里面的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28